核酸纯化要满足哪些要求？

对于许多分子生物学和基因组学应用，从克隆和PCR到基因组测序和芯片分析，DNA纯化是唯一的方法。然而，选择最好的净化套件并不容易。例如，当您纯化基因组DNA时，您需要一个可以温和地处理核酸而不分离质粒DNA的试剂盒。而且新一代测序技术对样本的要求很高，我们也需要一些特殊的产品来纯化DNA。这里，我们介绍一些新的选项。盐沉淀法震中master pure(Illumina子公司Illumina)？CompleteDNAPurificationKit采用专利的盐沉淀法。该系列试剂盒涵盖各种样品类型，包括血液、固定组织、植物、酵母、昆虫等。，可以在短短30分钟内带来核酸的高产量而损失很少。据Epicentre高级产品经理CristineKinross介绍，使用这些试剂盒，用户在为测序或其他分子生物学应用准备样品之前，不需要进行额外的纯化。它们可以去除蛋白质和其他细胞碎片，而不会引入必须去除的有毒化合物，从而避免重复洗涤并提高核酸产量。金罗斯说:“MasterPure回收的核酸纯度极佳，可以让样本直接进入测序文库的制备。”当然，它也适用于其他应用，包括芯片、qPCR和克隆。此外，该试剂盒也可用于RNA纯化。获得总核酸后，通过DNA酶处理可以获得总RNA。各种试剂盒Promega提供了各种核酸纯化试剂盒，使用几种不同的策略。比如巫师？GenomicDNAPurificationKit基于经典沉淀法，可以灵活高效地从全血、组织培养细胞、动植物组织、酵母和细菌中提取基因组DNA。ReliaPrep呢？该系列试剂盒采用柱提取法，简单快速。此外，Promega还提供了基于磁珠纯化的试剂盒。Promega基因组学全球产品经理EricVincent表示:“尽管溶液的确切组成会有所不同，但裂解、结合、洗涤和洗脱的基本过程适用于不同的结合方法(如硅胶或纤维素)、不同的纯化形式(纯化柱或磁珠)，以及手动和自动纯化操作。”对于一些非常重要的样品类型(如FFPE样品)，需要一些特殊的操作或处理。“我们开发了独特的结合/洗涤缓冲液，可以有效地去除抑制下游反应的物质，而优化的系统使研究人员能够捕获少量的核酸，并以小体积(小于30μl)洗脱它们，我们还开发了适用于各种试剂和通量的自动化解决方案，”文森特说。这些试剂盒提供了完整的解决方案，能够以非常小的体积洗脱核酸，同时避免抑制剂残留在洗脱液中。通过这些试剂盒纯化后，核酸可用于下游分析，如PCR、Sanger测序、下一代测序和芯片。QIAGEN经典的硅胶膜核酸纯化试剂盒是依靠DNA和硅胶膜在纯化柱上的结合。洗去抑制剂，完整的DNA随后从柱上洗脱下来，产量高，纯度高，带来了质量更高的新一代测序文库。QIAGEN样品制备全球产品经理Marco Lidori认为，在处理极小样品或FFPE等困难样品时，高产量变得尤为重要。FFPE样本产生的DNA中可能出现随机的胞嘧啶脱氨作用，这可能导致人工单核苷酸多态性(SNP)。然而，QIAGEN的GeneReadDNAFFPEKit可以去除脱氨基的胞嘧啶，避免在NGS实验中产生错误的结果。该产品尚未正式上市。如果您有兴趣试用，请填写信息。“我们的大多数试剂盒已经在NGS应用中得到验证，从循环肿瘤DNA的全基因组测序到微生物组，”Polidori说。这些试剂盒使用户能够从各种样品中获得高质量的DNA，避免FFPE样品的C-T错觉，并在短时间内获得高分子量的DNA。MagAttractHMWDNAkit可以通过简单的磁珠操作纯化100-200kbDNA。整个纯化过程温和去除污染物和抑制剂，收率和纯度极高。由离液盐公司适马-奥尔德里奇提供的GenElute？mammaliangenomicpurification kit是一种基于离液盐试剂的产品。在含有离液盐的溶液中，样品被裂解以确保大分子的完全变性。加入乙醇使DNA与硅胶膜结合。洗去污染物，在Tris缓冲液中洗脱DNA。通过专门选择用于分离基因组DNA的硅胶膜，该试剂盒使用户能够从各种样品中纯化高质量的DNA，包括培养的细胞、组织(包括大鼠尾巴)、新鲜全血或白细胞。据介绍，这种试剂盒结合了硅胶膜结合和微量离心的优点，避免了昂贵的树脂、乙醇沉淀和苯酚、氯仿等有害有机物。更重要的是，纯化的DNA可用于限制性酶切、PCR、Southernblot、测序等。(作者:JamesNetterwald/生物学编译)