Taq DNA聚合酶简介

2注释Taq DNA聚合酶从嗜热真菌yT 1中分离。YT是一种嗜热真菌，能在70 ~ 75℃生长。它是1969年从美国黄石国家森林公园的火山温泉中分离出来的。该酶基因全长2496个碱基，编码832个氨基酸，酶蛋白分子为94KDa。其比活为200000单位/毫克。在75 ~ 80℃时，每个酶分子每秒可延伸约150个核苷酸，70℃时延伸大于每秒60个核苷酸。在55℃时，是24个核苷酸/秒。温度过高(90℃以上)或过低(22℃)都会影响Taq DNA聚合酶的活性。虽然90℃以上几乎没有DNA合成，但该酶确实具有良好的热稳定性，在PCR循环的高温条件下仍能保持较高的活性。在92.5℃、95℃和97.5℃下，PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分别在65438±0.30min、40min和5 ~ 6 min后仍能保持50%的活性。实验表明，PCR反应的变性温度为95℃ ~ 20秒，50次循环后，Taq DNA聚合酶仍有65%的活性。Taq DNA聚合酶的热稳定性是其应用于PCR反应的先决条件。也是PCR快速发展和广泛应用的原因。Taq DNA聚合酶也有逆转录活性，类似于逆转录酶。这种活性的温度一般为65 ~ 68℃，在Mn2存在下，其逆转录活性较高。

TaqDNA聚合酶是一种依赖于Mg2的酶，其催化活性对Mg2的浓度非常敏感。当dNTP的浓度为0.7 ~ 0.8 mmol/L时，用不同浓度的Mg2进行PCR反应10min，结果表明，当Mgcl2的浓度为2.0 mmol/L时，该酶的催化活性最高，该浓度能最大限度地激活TaqDNA聚合酶的活性，当Mg2浓度过高时，会抑制Taq DNA聚合酶的活性，当Mgcl2的浓度为10mmol/L时，由于Mg2可以与dNTP结合，会影响PCR反应液中游离Mg2的浓度，所以在不同的反应体系中，Mgcl2的浓度要适当调整。优化浓度。一般来说，Mg2的浓度应至少比dNTP的总浓度高0.5 ~ 1.0 mmol/L。适当浓度的KCL可使Taq DNA聚合酶的催化活性提高50～60%，最佳浓度为50mmol/L，当KCL浓度高于75mmol/L时，Taq DNA聚合酶的活性受到明显抑制。