小核酸转染试剂的细胞毒性是否极低？

◎优异的细胞转染性能:细胞转染阳性率达90%以上，基因敲除效果明显，A549细胞层粘连蛋白A/C基因敲除效率达95%以上；

细胞毒性极低:转染细胞死亡率小于10%，大大降低了细胞毒性对实验结果的影响；

◎转染范围广，大多数贴壁细胞系都能获得理想的转染结果。

产品介绍

RFect小核酸转染试剂是由国际著名科学家崔坤元博士领导的我公司研发团队在美国西雅图实验室研发成功的新型小核酸转染试剂。RFect可用于转染200bp以内的小分子RNA和DNA，如siRNA、反义RNA、microRNA等。转染细胞包括大多数贴壁细胞，如普通细胞系和肿瘤细胞系。目前，无论是国外还是国内，转染试剂的主要成分都是脂质体或聚乙烯亚胺(PEI)，两者的细胞毒性都很大，转染效果都很差。RFect采用新型动物源纳米材料，毒性低，转染性能优异。与其他品牌的小核酸转染试剂相比，RFect的细胞转染阳性率一般在90%以上，核纤层蛋白A/C基因的抑制效率在95%以上，而其他品牌的转染试剂的细胞转染阳性率一般不到70%，核纤层蛋白A/C基因的抑制效率不到75%。RFect的细胞毒性很低，转染细胞死亡率小于10%，而其他品牌试剂的转染细胞死亡率一般在30%以上。血清对转染效果无影响，无需刻意添加或更换培养基。我们已经就RFect小核酸转染试剂的材料合成和试剂制备申请了国际专利，并通过PCT覆盖了世界上多个国家和地区。本产品适用于细胞系转染和原代细胞转染。请选择RFectPM小核酸转染试剂。

操作步骤:本说明书适用于24孔培养板的转染实验。对于其他规格的培养板的用量，请参考下表，该表显示了每个孔的用量和体积。

A.细胞接种:转染前一天接种细胞，每孔500 μl培养基，使转染时细胞密度为30-50%，尽量不使用抗生素。

B.SiRNA-rfect混合物的制备:

1.6pmol siRNA用50μl无血清培养基稀释。

2.2μl试剂用50μl无血清培养基稀释。轻轻5分钟，并在室温下孵育5分钟。注意:一定要在25分钟内完成第三步，不要拖延太久。

3.孵育5分钟后，用RFect稀释液(总体积100μl)孵育siRNA稀释液5分钟。轻轻混合并在室温下孵育20分钟。

C.将混合物加入培养的细胞中(完全培养基培养):

1.将100μl的混合物加入含有0.5ml培养细胞的培养孔中。轻轻摇动培养皿，混匀。

2.37℃培养18-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6小时后可以更换培养基，但不是必须的。孵育时间的长短取决于细胞类型，

干扰基因本身及分析方法。可以为实验设置不同的孵育时间，以确定最佳的孵育时间。

转染实验优化:为了提高转染效率，建议优化转染条件，尤其是首次转染。比如:24孔培养皿，调整？siRNA和试剂的用量。siRNA的剂量调整在0.6-30 pmol(终浓度1-50 nm)之间，RFect试剂的剂量调整在1.0-3.0 μ l之间，客户可以按照常规剂量进行预实验。如果实验结果不理想，可以适当调整和探索转染剂的用量。

转染实验要点:

l转染时尽量不要使用抗生素，否则会导致细胞死亡增加；

l第一次实验中siRNA的剂量设定为10nM、30nM、50nM、100 nM的终浓度，后续实验根据实验结果进行修正。