多克隆抗体的纯化方法有哪些?
纯化抗体的方法很多,建议使用蛋白A或蛋白G微球纯化法作为最常用的方法。这种方法效率高,可以为普通的实验方法提供足够的纯化抗体,而且随着商用蛋白A和蛋白G底物的出现,任何来源的抗体都可以纯化。传统的层析也可用于抗体纯化。在某些情况下非常有用。这些方法包括DEAE离子交换色谱法、硫酸电镀沉淀法和其他方法。而用蛋白G或蛋白A亲和柱法纯化比其他方法简单,纯化效果是其他方法的数倍。所以,在所有方法中,我推荐这个方法。
有一种情况是G蛋白或A蛋白亲和柱不适合纯化抗体,即多克隆抗体需要进一步分离,针对某一特定抗原的成分需要分离。此时,抗原结合亲和柱可用于纯化抗原依赖性抗体。
原理是抗原抗体结合。蛋白A和G锚定在树脂上,而IgA和IgG在通过树脂柱时可被蛋白A和G捕获,其他杂质会在柱上被洗掉。最后,IgA和IgG可以通过特殊的洗脱剂纯化。原理和普通蛋白纯化一样,只是吸附介质不同。