如何提高crispr效率

大多数关于植物基因组编辑的研究使用来自化脓性链球菌的CRISPR-Cas9系统(SpCas9)。spCas9的识别依赖于特定的PAM序列NGG，这极大地限制了系统中编辑位点的选择范围。为了解决这个问题，研究者们从不同的方向出发，寻找解决方案。

2065438+2006年3月，中国水稻研究所王克俭研究组研究人员通过定点突变获得了Cas9蛋白的变异体，并成功编辑了水稻基因组中的相邻序列，大大扩展了基因编辑位点的选择范围(胡等，2016)。然而，与原有的CRISPR-Cas9-VQR系统相比，CRISPR-Cas9系统的编辑效率仍然较低，限制了该系统在水稻中的推广应用。

6月2017，12，王克俭团队与中科院遗传与发育生物学研究室李佳阳团队合作，发表了一篇题为《提高的效率？水稻CRISPR-Cas9-VQR精密基因组编辑”(胡等，2018)通过优化sgRNA的结构，利用水稻内源强启动子驱动Cas9和变异体的表达，显著提高了水稻CRISPR-Cas9和CRISPR-cas 9-系统的基因组编辑效率。通过实验，在水稻中最高编辑效率可以达到近80%，最高提升幅度可以达到8倍。同时，该系统可以通过同工酶连接将多个sgRNA串联起来，同时编辑多个位点(构建方法参见王春博士、王克俭团队2015发表在《遗传与基因组学杂志》上的文章；王等，2015).在多站点编辑中，效率提升更明显，可以达到15倍。因此，修改后的CRISPR-Cas9-VQR系统将成为编辑多NGA目标站点的有力工具。