RNA的提取方法
1.苯酚提取法:先用卵酶K和SDS破碎细胞,消化蛋白,再用苯酚和酚氯提取,高速离心后取上清液。获得的DNA大小为100-150kb。
2.甲酰胺解聚法:如上破碎细胞,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合体,再透析获得DNA,获得约200 KB的DNA。
3.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解液铺在乙醇上,然后用钩状或U形玻璃棒在界面处轻轻搅拌,DNA沉淀缠绕在玻璃棒上。产生的DNA约为80kb。
4.异丙醇沉淀法:与1法基本相同,仅用2倍体积的异丙醇代替乙醇,即可去除小分子RNA(溶于异丙醇)。
5.表面活性剂的快速制备方法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或苯酚去除蛋白质,用乙醇沉淀或透析。
6.加热法快速制备:96℃-100℃加热五分钟,然后离心取上清液,可用于PCR反应。
7.碱变性快速制备:先用NaOH 20分钟,再加入HCI中和,离心后取上清液,含少量DNA。
扩展数据:
DNA提取的原理:
1,保证核酸一级结构的完整性;
2.核酸样品中不应有能抑制酶的有机溶剂和浓度过高的金属离子;
3.其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂质分子的污染应减少到最低限度;
4.其他的核酸分子,比如RNA,也要尽可能的去除。
百度百科-DNA提取