谁能介绍一下关于替考拉宁提取的知识？请告诉我有关它的情况。

鉴于T-A2易溶于水、丙酮水溶液和甲醇、乙醇等有机溶剂的特性，可以用溶剂萃取法从发酵液中提取T-A2。Bardone[ J]等人首次使用不溶于水的有机溶剂如氯化C1-C4烃或C4-C6烷醇提取T-A2。首先过滤发酵液，用10%盐酸(含少量氯化钠)调节滤液pH至3.5，然后用丁醇萃取，再用丁醇萃取滤液。

高速离心、浓缩、冷却、沉淀得到粗品。菌丝体水洗，用10%盐酸调pH至3.5，再用丙酮水溶液(8: 2)萃取，蒸去丙酮保持PI-I 3.5不变。用丁醇提取，离心，浓缩，冷却沉淀出粗品。通过HPLC和微生物测定，合并的粗产物的纯度为64.8%。另一项专利报道了一种略微改进的提取方法。即水溶性有机溶剂，如丙酮、乙腈、正丙醇、甲乙酮、二甲基亚砜等。直接加入到酸化的发酵液(pH = 3 ~ 4)中以聚集T-A2，通过离心或过滤除去菌丝体，将溶液部分浓缩并冷却以沉淀出粗T-A2。产率为64.5% ~ 88.7%。与上述两步法相比，该方法操作简单，提高了产率。

2吸附法

T-A '抑菌的原理是与UDP-N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-谷氨酰-L-赖氨酰-D-丙氨酸(UDP-五肽)末端的游离羧基紧密结合，即D-Ala-D-Ala，形成T-A2和N，N-二乙酰-L-赖氨酰-1。

丙氨酰-D-丙氨酸的复合物干扰细胞壁的正常合成，从而抑制细菌的生长。进而证明T-A2对末端为D-Ala-D-A1A的肽段具有很高的亲和力(Ka = 1.5× 106)？j .根据这一机理，通过将二肽D-Ala-D-Ala或多肽X-D-Ala-D-Ala (X是氨基酸残基)连接到载体上制成生物选择性亲和介质，可以有效地分离和纯化T-A2。其亲和载体可采用琼脂、葡聚糖、纤维素、聚苯乙烯或丙烯酸聚合物等大分子物质，通过交联反应与D ~ Ala ~ D-Ala或X-D-Ala-D-Ala连接形成亲和介质。或者，具有“臂”的载体(如6-氨基己酸、N-羟基琥珀酰亚胺或脂肪酸链)可以与上述肽段连接形成亲和介质，并直接

将发酵液装入具有这种亲和介质的色谱柱中。实验表明，该方法能有效分离纯化糖肽类抗生素，尤其是T-A2和T-1衍生物Corti等。用Sepharos 4B-D-Ala-D-Ala从发酵液中直接纯化T-1。上柱后用碱性缓冲液解吸，可得到纯度约为94%的t。

-A，产率达到65%。并且这种亲和介质也已经成功地用于浓缩和纯化尿液和血浆中的T-A2。Folena-Wasser-Man等人用AFI凝胶10-D-AA-D-Ala纯化T-1，取得了很好的效果。

解吸附溶液可以是碱性缓冲溶液，如pH 9.50.4 mol/l的碳酸氢铵(包括乙腈)、pH 9.25 mol/l的碳酸氢钠(包括乙腈)、PHLL 0.1 mol/l的氨水(50%乙腈)、菲尔0.15 mol/l的氯化钠磷酸盐缓冲溶液。实验表明，pH在10 ~ 11.5+0.5范围内的解吸剂是有效的，其解吸率可达97%以上。由于发酵液中杂质较多，如果直接上柱，时间长了必然会污染色谱柱。因此，在上柱之前，可以对发酵液进行初步分离，如过滤、萃取、沉淀等过程，这样不仅可以增加色谱柱的使用寿命，还可以提高其吸附效果。也证明了利用基于分子吸附原理的聚酰胺树脂可以很好地分离纯化T-A2。初步纯化后，将发酵液调节至pH 5.8，然后通过聚酰胺(CC-6、SC-6、cc6Ac、sc6Ac)树脂柱，用甲醇水溶液(9: 1)洗脱。蒸发洗脱液中的甲醇，加入丙酮，在低温(5℃)下冷却或调节pH至等电点沉淀T-A2，纯度为85。另外，在发酵液的初步纯化中，如果在pH 10.5 ~ 11的条件下分离菌丝体，至少有90%的产物会进入滤液中，所以这一步可以制得Tekola。

宁提纯工艺总收率提高了50%。

3离子交换法

从T-1的化学结构来看，它有一个氨基和一个羧基，是一种两性化合物。所以可以用离子交换树脂提取。阳离子交换树脂(IR120或Dowex50)首先用作纯化载体。后来有专利报道用聚苯乙烯二乙烯苯磺酸钠DOW [XFS-43278.002]强钠盐树脂纯化T-A2。将树脂放入发酵液中，室温下搅拌6小时，用水洗涤饱和树脂，然后将树脂放入pill0.5的氢氧化钠溶液中，保持pH恒定，搅拌2小时，滤出树脂，然后脱盐浓缩，得到成品T-A2。由于使用酸性离子交换树脂会增加T-A2糖部分的降解，强碱性离子交换树脂容易增加T-A2的差向异构化，而离子交换树脂由于选择性差，不能有效用于纯化T-A2，因此该方法的应用前景并不乐观，鲜有记者见到。

4液相色谱法

液相色谱是分离和鉴定化合物的有效方法。它可以有效地分离和纯化复杂的混合物。Borghij等用反相高效液相色谱法成功分离了纸层析和薄层层析得到的T-A2，得到了5个单一组分，T-A2-L ~ T-A2-5。工艺如下:将溶剂萃取或其它方法得到的T-A2溶于0.2%甲酸铵-乙腈(9: 1)中，作为溶剂。

用1mol/L NaOH调节pH至7.5，导入制备型HPLC柱(硅烷化硅胶柱)，用10% ~ 20%乙腈和0.2%甲酸铵混合溶液线性洗脱，逐级收集，用HPLC分析鉴定，合并HPLC分布相似的溶液，减压浓缩除去有机溶剂。通过制备HPLC制备浓缩液，用50%乙腈洗脱，浓缩洗脱液后，通过加入丙酮-乙醚(1: 1)沉淀T-A2-L和T-。

一英尺二英寸.T ~ A2、T-A24和T-A2可通过半制备HPLC(Whatman Partisil ODS M-9)获得，用0.2%甲酸铵-乙腈(76: 24)解吸，脱盐并沉淀。Cometti等人也使用低压制备液相色谱(Jobin-Yron柱)纯化T-A2(流动相Ci43cn/Nai-'I2po4 (27/23))。张丽华等用模拟移动床色谱法研究了替考拉宁的纯化条件，取得了良好的效果。但目前，该方法仍处于实验室阶段。另外，根据韩国的资料，目前T-A2的纯化采用溶剂法和HPLC相结合的方法，收率在65%左右。

参考文献-替考拉宁精制技术的研究进展-王增霞、吴明、姜宁