hpaepic细胞用什么培养基?

培养基的选择:

细胞培养是实验室最常见、最基础的实验,但不是最简单的。不要小看细胞培养,这里有一个很大的问题。有时候细胞状态不好,没办法做转染、药物筛选等实验。影响细胞培养的因素很多。先说培养基和血清。

◆ MEM是从Eagle的基本培养基(BME)发展而来,其中成分的范围和浓度都增加了。

◆改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的,现在常用于培养贴壁细胞。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍,维生素浓度是MEM的四倍。HCO3-和CO2的双浓度起到了更好的缓冲作用。最初的配方中,葡萄糖含量为1000 mg/L,后来为了某些细胞的生长,葡萄糖含量调整为4500 mg/L,这就是人们常说的低糖高糖。

◆ aMEM含有额外的氨基酸、维生素、核苷和脂肪酸,可广泛应用于各种细胞类型,包括对营养成分有严格要求的细胞。

Ham的F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的,现在广泛用于克隆形成率和原代培养的分析。F12也可与DMEM等体积混合,得到高浓度、成分多样的产品。这种培养基已经用于许多更难培养的原代培养和细胞系。

◆ RPMI 1640培养基是专门为淋巴细胞培养设计的,已广泛用于悬浮细胞培养。

准备几种培养基,然后花两周左右的时间做一个简单的细胞生长实验,选出最适合的。

以前大部分实验室都是用干粉培养基,但是配制过程比较复杂,在溶解、调pH、过滤的过程中可能会出现一些浓度误差,而且有些实验室的水质也不理想,所以培养效果会有所不同。

血清的选择:

含生长因子的血清能促进细胞增殖,含粘附因子的血清能促进细胞粘附,还具有抗胰蛋白酶活性。血清也是矿物质、脂类和激素的来源。最常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和马血清。牛血清是根据采血时间来分类的。采血时间越早,营养越丰富,抗体越少,所以胎牛血清适合要求高的细胞系和克隆培养。

血清批次之间的差异是不可避免的,来源于不同的制备方法和灭菌方法、动物的年龄差异和血清的保存条件,与采血动物的来源密切相关。不同的牧场,不同的气候和其他环境因素都可能影响血清的质量。所以,如果你选择了一种血清,就要尽量用久一点。需要更换时,也应尽可能与原批次血清相似。现在很多公司都提供血清储备。一旦选定了某一批次的血清,最好储备够用一年,可以避免很多麻烦。

血清是细胞培养中不可或缺的成分,但不同批次的血清差异较大。更换血清时,需要进行大量的检测,以确保更换的血清与原来的血清相似。血清的供应也是一个必须考虑的因素。

无血清培养基,通常表示为SFM,顾名思义,是指细胞培养中不需要添加血清,但在某些应用中可能会添加生长因子或细胞因子。在无血清培养基中加入血清的主要成分,如粘附因子、生长因子、必需营养素、激素等,可以减少上述血清带来的不利因素,使细胞培养的条件更加稳定。但它并不完美,从含血清培养过渡到无血清培养的条件也没有想象中那么直接。处于不同分化发育阶段的细胞(例如,与定向前体细胞相比)需要不同的配方,生长因子和细胞因子的选择尤其重要。而且在去除血清的同时,也去除了一些血清蛋白的保护和解毒作用,所以对试剂和水的纯度以及仪器的清洁度要求更高。另外,它的价格比普通培养基贵很多。

这么多种,选择起来也很头疼。除了一些公开配制的培养基,如培养内皮细胞的MCDB 131(适马),大多数液体培养基都是有专利的,也就是说,其中的成分是保密的。然后你只能搜索文献,找供应商推荐,然后用自己的细胞做几次继代培养,选出最合适的培养基。毕竟实践出真知。