如何验证蛋白的相互作用,fret

题　名用FRET方法研究与Mps1蛋白有相互作用的CENP-E蛋白结构域

作　者刘子杰 翁亚光 李素彦 施琼 蔡燕 刘斌 张燕 阎琛

机　构重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学省部***建教育部重点实验室重庆市重点实验室,重庆400016

刊　名《中国生物工程杂志》 2009年第29卷第4期,28-34页

关键词CENP-E Mps1 蛋白质相互作用 荧光***振能量转移

文　摘目的：探索与Mps1蛋白有相互作用的CENP-E蛋白结构域。方法：将重组质粒pEGFP-CENPE2（674～1085位氨基

酸）、pEGFP-CENPE3（1200～2134位氨基酸）转染人胚肾293（HEK293）细胞,采用受体漂白荧光***振能量转移方法（FRET方

法）,检测EGFP-CENPE2、EGFP-CENPE3和Mps1间的能量转移率（Ef）,进一步用免疫***沉淀方法验证FRET的实验结果。结果：重

组质粒转染HEK293细胞后经激光***聚焦显微镜观察重组质粒表达的融合蛋白与Mps1都存在着***定位;FRET检测结果显示EGFP-CENPE3和

Mps1间的能量转移率为[（12.63±0.48）%,n=30],pEGFP-CENPE2和Mps1间的能量转移率为

[（3.07±0.21）%,n=30],与对照组[（2.96±0.27）%,n=30]比较pEGFP-CENPE3和Mps1间的能量转移率差异存

在显著性（p〈0.05）,免疫***沉淀实验结果显示EGFP-CENPE3与Mps1蛋白间存在相互作用。结论：FRET技术和免疫***沉淀实验证明了

EGFP-CENPE3与Mps1间存在着相互作用。