TLC基本操作中有哪些关键技术？每次操作需要注意什么？
薄层色谱是在洗净的玻璃板上(约10×3cm)均匀涂上一层吸附剂或支撑剂。干燥活化后，用扁嘴将样品溶液滴在距薄层板一端约65438±0cm的起始线上，风干或吹干后，将薄层板置于装有展开剂的展开剂槽中，浸没深度为0.5cm，当展开剂前缘距顶部约65438±0cm时，取出层析板，干燥，喷上显色剂，或在紫外灯下展开。
注意事项:
1铺装薄层板:用于铺装板材的匀浆液不宜过厚或过薄:过厚，板材易因拖拉或停止而产生分层；太薄，水分蒸发后，板材表面粗糙。均质比例一般为硅胶G:水=1:2 ~ 3，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。根据经验，研磨匀浆的时间与空气湿度有关，一般通过拿起研磨棒时匀浆的滴落情况来判断。越浓越难滴。匀浆的稠度不仅影响板的光滑度，还影响板涂层的厚度，进一步影响上样。涂层薄，容易过载；涂层较厚，显色不那么明显。通常，板的质量对薄层色谱鉴别的影响很小，但最重要的影响是展开剂的制备和展开剂体系的饱和度。2采样:尽量使用小采样管。如果有足够的耐心，最好只用1微升的采样管。这样斑点的斑点小，展开的色谱图分辨率好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好。样品溶液的水含量大，点扩散大。样品溶液的溶剂一般为无水乙醇、甲醇、氯仿和乙酸乙酯。用吹风机的热风吹干好的薄层板或放入烘干机中烘干。当TLC用于定量时，取样是主要的误差源。供试液的溶剂具有不同程度的洗脱能力，因此取样时样品可在原点呈环状展开，原点直径的扩散促进了这种展开，凯泽称之为“上样的环状色谱效应”。如果样品在溶剂中的溶解度大，原点就会变成空心环。这种效果对后续的第一次开发有非常负面的影响。测试溶液中残留的溶剂也会改变展开的选择性，特别是当测试溶液中溶剂的极性与展开剂的极性大不相同时。此外，残留在原点的亲水性溶剂吸收大气中的水分(特别是在高湿度环境中)对色谱的影响也不可低估。因此，需要同步干燥或后续干燥，以在源头去除残留溶剂。但应尽量避免高温加热。例如，样品变成固体后，部分或全部会强烈吸附在吸附剂的颗粒上，促进硅胶催化活性表面的化学反应，导致样品变性(特别是热不稳定物质)。至少，流动相在展开时会以比移动速度慢得多的速度溶解这部分样品，产生拖尾(点拖尾的原因之一)。
3.展开剂的制备选择合适的量具，将各组分溶剂移入分液漏斗，用力摇动，使混合溶液充分混合后静置。如果是分层的，就用大的一层作为显影剂。绝对不建议将各组分溶液倒入显影筒，摇动显影筒来配制显影剂。混合不均匀和展开剂未分离会导致色谱完全失效。每种溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，实验室仪器的准确度应尽量达到最高。例如，应使用1毫升的单标签移液管吸取1毫升的溶剂，移液管应满足计量认证要求，尽管在大多数情况下这是不必要的。膨胀系统的饱和一般采用双罐膨胀筒，一罐用来放显影剂，另一罐可以加氨水或硫酸。将待展开的板材放入两个凹槽之间的平台上，放在斜架上，盖上展开气缸。让显影剂的蒸气充满显影筒，并使薄层板吸收的蒸气达到饱和，以防止边缘效应，饱和时间约为半小时。展开时，不可避免地要开盖，将薄层板放入展开剂中，但对薄层板与蒸汽的吸附平衡影响不大，当然动作要尽量轻、快。5温湿度控制温湿度对薄层影响很大。在不冷冻的前提下，温度越低分离越好，越难分离的需要在低温下分离，比如人参皂苷。湿度的影响估计主要是影响薄层板的吸附能力，导致选择性(容量因子)的变化，湿度要根据实际情况确定。温度控制用空调或冰柜，湿度控制用另一个槽放相应浓度的硫酸。6薄层色谱一般显色方法一般显色方法主要有:1、紫外线照射法:方便且不损伤样品；2.碘蒸气法:普适性强，与紫外法结合比单独使用两种方法灵敏度高；3.荧光试剂:做一个荧光背景，使原来在紫外光下的非荧光物质可以被识别，荧光物质更明显；4.硫酸溶剂:对大多数有机物质有效，但具有破坏性。