悬浮细胞中小核酸的转染特性

悬浮细胞转染性能优异:细胞转染阳性率一般在75%以上，基因敲除效率在80%以上；

细胞毒性极低:转染细胞死亡率小于10%，大大降低了细胞毒性对实验结果的影响；

◎转染细胞范围广，大多数悬浮细胞都能获得理想的转染结果。

产品介绍

RFectSP悬浮细胞小核酸转染试剂是我们研发团队在RFectPM原代细胞小核酸转染试剂的基础上研制成功的一种专门用于悬浮细胞小核酸转染的试剂。RFectSP可用于转染200bp以内的小分子RNA和DNA，如siRNA、反义RNA和microRNA，可转染大多数悬浮细胞。目前，悬浮细胞中的核酸转染是国内外研究的热点问题，市场上还缺乏真正有效的悬浮细胞小核酸商业化转染试剂。RFectSP能高效转染大多数悬浮细胞，获得理想的基因敲除效果。对于大多数悬浮细胞，RFectSP的转染阳性率在75%以上，而转染细胞的死亡率小于10%。RFectSP的使用也非常简单。首先在室温下将sRNA和RFECTSP混合，然后将SiRNA和RFectSP的混合物直接加入到含有培养基的细胞中。血清对转染效果无影响，无需刻意添加或更换培养基。我们已经申请了RFectSP悬浮细胞小核酸转染试剂的材料合成和试剂制备的国际专利，并通过PCT覆盖了世界多个国家和地区。

操作步骤:本说明书适用于24孔培养板的转染实验。对于其他规格的培养板的用量，请参考下表，该表显示了每个孔的用量和体积。

A.细胞接种:转染前一天接种细胞，每孔500 μl培养基，使转染时细胞密度为30-50%，尽量不使用抗生素。

B.SiRNA-rfectsp混合物的制备:

1.6pmol siRNA用50μl无血清培养基稀释。

2.2μl RFectSP用50μl无血清培养基稀释。轻轻5分钟，并在室温下孵育5分钟。注意:一定要在25分钟内完成第三步，不要拖延太久。

3.孵育5分钟后，用RFectMN稀释剂(总体积100μl)稀释siRNA 5min。轻轻混合并在室温下孵育20分钟。

C.将混合物加入培养的细胞中(完全培养基培养):

1.将100μl的混合物加入含有0.5ml培养细胞的培养孔中。轻轻摇动培养板5分钟，并充分摇动5分钟。

2.37℃培养48-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6小时后可以更换培养基，但不是必须的。孵育时间的长短取决于细胞类型，

干扰基因本身及分析方法。可以为实验设置不同的孵育时间，以确定最佳的孵育时间。

转染实验的优化:为了提高转染效率，最好优化转染条件，尤其是第一次。例如:24孔培养板，调整siRNA和RFectSP试剂的用量。siRNA的剂量调整在6-60 pmol之间(终浓度10-100 nm)，RFectSP试剂的剂量调整在1.0-3.0 μ l之间

转染实验要点

l转染时尽量不要使用抗生素，否则会导致细胞死亡增加；

l第一次实验中siRNA的剂量设定为10nM、30nM、50nM、100 nM的终浓度，后续实验根据实验结果进行修正。