分子生物学相关的实验方法有哪些?
主要包括植物、动物和微生物基因组DNA的提取和鉴定,哺乳动物组织总RNA的提取和鉴定,质粒DNA的提取和鉴定,PCR扩增,分子杂交技术,限制性内切酶消化,分子克隆的全过程和基因文库的构建。
分子生物学:在分子水平上研究生命现象的物质基础。研究细胞成分的理化性质和变化以及这些性质和变化与生命现象的关系,如遗传信息的传递、基因结构、复制、转录、翻译、表达调控、表达产物的生理功能、细胞信号转导等。
分子生物学最基本的技术是蛋白质的表达和纯化。首先,将编码目的蛋白的DNA序列克隆(使用PCR技术和限制性内切酶)到作为表达载体的质粒中。然后将构建的质粒导入宿主细胞。编码序列由宿主细胞的表达系统表达,该表达系统由质粒上的特殊启动子元件驱动。质粒通常带有抗生素抗性标签,以便于质粒筛选。
质粒可以插入细菌或动物细胞中。将外源DNA导入细菌称为转化,可通过电穿孔、显微注射、阳性吸收、融合等方法实现。将外源DNA导入真核细胞,如动物细胞,称为转染。转染技术包括磷酸钙法、脂质体法和一些获得专利的商业转染试剂。DNA也可以被病毒或病原菌带入宿主细胞。当这种病毒或病原体转染技术应用于细胞时,术语是“转导细胞”。
聚合酶链式反应(PCR)是一种非常常见的体外复制DNA的技术。简而言之,PCR技术可以使单链DNA被复制数百万次,也可以让复制的DNA序列以预定的方式被修饰。例如,PCR技术可用于引入限制性位点或突变(改变)特定的DNA碱基。PCR技术还可以从c DNA文库中获得特定的DNA片段,或者从另一个角度判断一个cDNA文库中是否含有特定的DNA片段。
凝胶电泳是分子生物学中最重要的技术。基本原理是DNA、RNA、蛋白质可以通过电场分离。在琼脂糖凝胶电泳中,DNA和RNA可以根据它们的分子大小被琼脂糖凝胶分离。类似地,蛋白质可以通过SDS - PAGE分离。此外,由于电荷不同,蛋白质也可以用等电聚焦电泳分离。