裸鼠皮下注射癌细胞需要注意什么？
不是所有的肿瘤细胞都能变成肿瘤。建议在正式实验前查看ATCC上的测试数据。比如看下面的红框。然而，ATCC缺乏这方面的资料，所以第二种方法是查阅文献。不过还是建议多查查文档。
如果非要用不能独立成瘤或难以成瘤的细胞系，请看第3点NOD SCID小鼠和第4点Matrigel法。
2.手机号是多少？
这个很难有一个标准的参考值。例如，我试验了一只非常凶猛的C6鼠神经胶质瘤，即使细胞数是10 4甚至更低，它也能生长。但是，大多数细胞系将落在10 5-10 6之间。有时候，你低了，不一定说不会成长，反而会慢慢成长。长得高不一定好，但是长得太快，肿瘤内血管形成不良，容易死亡。而且，如果通过腹腔或静脉注射药物，也不容易完全转运到肿瘤病灶。
基本上我们可以有一个体验，注射的细胞量可以让肿瘤在3-6周内生长到一个解剖大小。快不一定好，慢就是浪费时间。
3.小鼠的选择
基本上大家选择的都是胸腺缺陷的裸鼠BALB/c裸鼠，可以满足大部分实验。对于一些对免疫敏感的肿瘤，可以选择NOD SCID。但是NOD SCID是有毛的，一些特殊的肿瘤注射或手术需要备皮。
一般来说，4-6周龄的小鼠可以注射肿瘤。
4、如何处理细胞
从细胞室到动物室肯定要花很长时间。当细胞长时间离开培养环境，其活性会降低，导致实验失败。
在这里，我推荐通过洗涤、消化、离心等方法获得细胞沉淀后，悬浮在能维持细胞活力的缓冲液中。该缓冲液的组成为:在不含Ca2+和Mg2+的HBSS中加入终浓度为10-15 mM的HEPES和终浓度为1X的GlutaMAX。注意，请不要添加血清。
每个针头的细胞浓度应调整至100-200微升。例如，如果您要注射的细胞数量是10 6，那么将细胞悬液的浓度调整为100-200 ul。有些细胞很难达到高浓度，需要增加重悬量。个人认为每次注射最好不要超过300 ul，否则注射时容易漏出来。
细胞重新悬浮后，将其插入冰中备用。
有些细胞即使有结节也很难变成肿瘤甚至不能变成肿瘤。这时候可以尝试Matrigel法，为肿瘤细胞提供一个生长支架。
通常，我们使用低生长因子减少的不含酚红的基质胶，并且近似的蛋白质浓度将在10 mg/ml左右。Matrigel最终将与细胞悬液1: 1混合并注射。
注意两点:
1，温度一高，Matrigel就会凝固，所以使用时要在冰上操作。在加入细胞悬液之前，悬液也应该插入冰中冷却。或者，可以用上述缓冲溶液1: 1稀释基质胶，然后用于重新悬浮细胞沉淀物。含有基质胶的细胞悬液应始终置于冰上。
2.也是因为温度问题，注射的时候要注射一个，吸一个混悬液。另外，多准备几个注射器，万一堵了就换。
5、注射的方法
为了减少动物的痛苦，我会用异氟烷(异氟烷)作为吸入麻醉剂，对小鼠进行轻度麻醉，然后进行注射。下图是麻醉设备:右边是注射异氟醚的设备。利用麻醉的挥发性，通过调节气压阀，将麻醉气体泵入左边的密封盒中。一般小鼠可在5分钟内麻醉，并可维持麻醉时间约10-15分钟。
当然可以不打麻药直接注射(不违规)。但从动物福利和方便实验者的角度来看，麻醉总比不麻醉好。目前我单位皮下肿瘤移植实验的标准方案是吸入麻醉。但是这个在国内做的不是很好，没有统一的机构来管理。
注意，请合理使用麻醉剂。异氟醚吸入麻醉足够皮下注射，风险相对较低(在美国被列为管制药物附表VI，或者不是经典管制药物)。不需要使用氯胺酮/赛拉嗪等注射麻醉剂，属于管制药物，如果不涉及大手术就不应该使用。不宜使用苯巴比妥等其他注射剂，可能会影响肿瘤细胞的活性。
如果没有异氟醚挥发器，可以自己做一个简单的装置。如下图所示，在一个密封的罐中，放入含有异氟烷稀释液的棉花，将实验动物放入其中。麻醉剂的剂量由异氟烷相对于密封罐的体积来换算。
小白鼠倒下后，用打孔器在耳朵上做标记(0/0，1，0/1，1/1，* * *)。然后，一手用钝镊子轻轻夹起注射部位的皮肤，不要拉扯肌肉。另一方面，手持注射器(通常是小型胰岛素注射器)刺穿皮肤，注射细胞悬液。在注射过程中，可以明显看到皮下有一个小袋子鼓出来。注射后，让针头停留几秒钟再拔出来。不要马上拔，以免细胞悬液漏出。
如果没有麻醉，只能用手抓老鼠。如果你是右撇子，用左手的食指和拇指捏住鼠标的颈部皮肤，用小指和无名指夹住尾巴，这样左手翻过来的时候鼠标的侧面就露出来了。然后右手持针贴在皮肤上(目测会与皮肤保持10-20度的夹角)进针。注意，当针已经被刺穿时，保持针稍微向上以避免刺穿肌肉。值得注意的是，老鼠会挣扎，所以手要稳。(所以，麻醉后再注射多方便)
一般来说，如果注射量只有100-200 ul，这个操作就不会出现意外。但是如果注射量大，就比较麻烦了。不过据我学姐说，刺穿皮肤后，可以继续下到浅层肌肉，然后捡起来，回到皮下，开始注射。这样，大体积的细胞悬液就不容易漏出。但这种方法有一个缺点，就是肿瘤容易长到肌肉深处，所以当时测量体积并不准确。所以注射量要尽量小。
注射后，将小鼠放回笼子，观察其活力。当老鼠完全清醒时，它们可以离开动物房。