抑制素的试剂应用
2.微孔板:选择实验所需的板数。其余未使用的零件与干燥剂密封一起放回原袋中。1.用抗抑制素bB亚单位抗体包被的抗抑制素B包被的微孔板:96孔,2-8 & ordm;c密封保存。
2.标准A/样品稀释液:2ml× 1瓶,胎牛血清,含0pg/mL二聚体抑制素b .使用前2-8 &;ordm在C. 2-8&下保存;ordmc可以保存2周。on-20 & ordm;c可以保存很久。
3.标准B-G(inhibinbstandsb-G):1毫升× 6瓶,胎牛血清,含浓度为10、30、100、250、500、1000皮克/毫升的二聚体抑制素B。使用前2-8 &;ordm在C. 2-8&下保存;ordmc可以保存2周。on-20 & ordm;c可以保存很久。
4.抑制素对照:1毫升× 2瓶,浓度I和II,胎牛血清,含低浓度和高浓度抑制素A二聚体。使用前2-8 &;ordm在C. 2-8&下保存;ordmc可以保存2周。on-20 & ordm;c可以保存很久。
5.样本稀释液A: 10 ml× 1瓶,2-8 & ordm;保存在c下。
6.样本稀释液B: 10 ml× 1瓶,2-8 & ordm;保存在c下。
7.抗体-生物素结合物(即用型):10ml×1瓶,含生物素标记的抗抑制素A亚单位抗体。2-8 & amp;ordm保存在c下。
8.链霉亲和素-酶偶联物(即用型):10ml×1瓶,内含链霉菌和辣根过氧化物酶的组合。2-8 & amp;ordm保存在c下。
9.TMB底物溶液:15ml× 1瓶,2-8 &;ordm保存在c下。
10.终止液:15ml× 1瓶,含0.2M硫酸。2-8 & amp;ordm保存在c下。
11.洗涤浓缩液:100 ml× 1瓶,2-8 &;ordm保存在c下。所有试剂应平衡至室温(~ 25 &;ordmc)充分混合。标准品、质控品和待测样品应同时制成一式两份。
1.取出实验需要的板条,记录每个孔的位置。
2.将50微升标准品、质控品和待测样品加入相应的孔中。
3.向每个孔中加入25ul样品稀释剂A。
4.向每个孔中加入25ul样品稀释剂B。
5.封板,以300-400rpm的速度摇动,室温过夜(14-18小时)。
6.将板子洗3遍,用吸水纸拍干。
7.向每个孔中加入50微升抗体-生物素结合物。
8.密封平板,以500-700rpm的速度摇动,并在室温下孵育65438±0.5小时。
9.将板清洗6次,然后在吸水纸上拍干。
10.向每个孔中加入50微升链霉菌和辣根过氧化物酶的混合物。
11.密封平板,以500-700rpm摇动,并在室温下孵育20分钟。
12.洗板6遍。最后一次冲洗后,将洗液留在孔内15分钟后再取出。用吸水纸拍干。
13.向每个孔中添加100ulTMB底物溶液。
14.以500-700转/分的速度摇动,并在黑暗的室温下孵育15-30分钟。
15.向每个孔中加入100ul端接溶液。
在16.30分钟内读取450nm。
注意:零标准必须为空白。如果能实现双波长测量,可以在600或620nm读取,从450nm减去600(620)nm的吸收值,可以减少光学误差。使用血清样品通过静脉穿刺收集血液。样品取自2-8 &;ordmc可存放24小时,-20 &;ordmc或以下可保存30天。避免样品的反复冷冻和解冻。不应使用溶血性或血脂性样本。实验前,冷冻样品应解冻并彻底混合。