硝酸纤维素膜的应用技巧

1.蛋白质与膜的结合原理

蛋白质与膜的结合原理，已知的结合力有疏水力\H键\静电力等。，确切的结合原理还不清楚，主要靠假说支持。有两个主要假设:

1)先通过静电力结合，再通过H键和疏水作用长时间结合。

2)先通过疏水作用结合，再通过静电作用长时间结合。

两个假说都表明，结合过程分为两步，先结合，后长结合。由于组合原理的模糊性，该领域的工作在很大程度上依赖于实践经验。

2.膜对粘接的影响

1)膜孔径

有些技术人员倾向于用膜孔径来区分不同的膜，但请注意，这仅限于同一厂家的产品。如果产品是不同厂家的，这种比较是没有意义的。上面已经描述了膜孔径和色谱速度之间的关系。

随着膜孔径的减小，膜的实际可用表面积增加，膜结合蛋白的量也增加。用于估计表面积的参数是表面积比(实际可用表面积与所用膜的平坦面积的比率)。

另外，膜的孔径越小，层析速度越小，金标复合物通过T线的时间越长，反应越完全。

综合以上两点，得出膜的孔径越小，灵敏度越高的结论。但也减慢了运行速度，增加了非特异性结合的机会，即假阳性越高。因此，需要根据测试结果选择适合实际工程的膜，找到合适的平衡点。

2)不同制造商的膜差异

这种差异主要来自两点:

1 & gt；生产膜时，使用的聚合物和表面活性剂的来源、种类和数量都不一样。同样，在膜处理中，这两种物质一般对性能影响很大。

2 & gt治疗过程不一样。

3.生物原料、试剂和缓冲溶液的配方

1)生物原料作为CT线的生物原料，在不同的情况下使用，这里只做简单介绍。

首先，单克隆抗体与膜的结合优于多克隆抗体，主要是因为多克隆抗体有很多不同的表面位点，每个位点与膜的最佳结合条件略有不同，这无疑增加了优化的难度。

其次，分子量越大，蛋白质越难与固体物质结合。

2)缓冲溶液

人们最关心的可能是获得一种性能优异的配方，包括缓冲液、封闭液等等。

事实上，我不能给你提供一个通用公式的列表。因为不同的反应体系需要不同的配方来支撑，而且不同机构的反应体系也不一样。想要得到“鱼”，就要先学会钓鱼。为了不误导大家，我只就以下与公式相关的问题提供思路。具体公式请自行探究。

一般缓冲液的组成是PBS(或其他缓冲体系)+活性物质(针对某一特定问题)+PH调节。参考了之前的各种资料，我个人的看法是，配方原则要简单不复杂，根据自己的需要添加活性物质。很多原来需要添加的活性物质，由于制膜技术的提高，已经不再需要了。

推荐的缓冲体系为0.01M PBS PH7-7.2，对各种抗原和抗体有很好的适应性。

活性物质的情况大致列举如下:

少量NACL可降低信号强度，消除假阳性。

有机醇(甲醇、异丙醇等。)润湿薄膜，减少薄膜携带的静电，有利于结合涂层。个人不建议，因为电影制作工艺的提高。

表面活性剂(TW20，TX100)可以增加亲水性，避免空心线现象，增加颜色。

糖，保护剂，可以减缓老化速度，也可以增加亲水性。

调节酸碱度到一定的位置，可以消除假阳。

4.样本环境

环境湿度对薄膜沉积过程非常重要。最佳湿度一般为45-65%。

湿度过低时，薄膜上容易积累静电荷，薄膜上容易出现散斑，导致测试中出现疏水斑。

湿度过高时，薄膜上的毛细作用加强，点状薄膜容易造成CT线变宽甚至扩散。

为了保证采样时膜湿度的均匀性，通常在采样前将膜放置在这种湿度条件下一段时间。

5.取样仪器与膜表面状况的关系。

目前采样方式有两种，即刮膜式和非接触点膜式。非接触点膜式优于刮膜式，进口刮膜式优于国产刮膜式。

因为刮膜法是用软管刮膜表面的抗体，而膜本身的物理性质又软又脆，刮膜管会在其表面留下痕迹。由于进口刮膜机采用了更好的材料和控制系统，留下的划痕较轻，而国产仪器较差，留下的划痕更严重。划痕容易对层析金标复合物形成抗性，导致假阳性。同时，跑步时如果T线位置有细线(鬼线)也容易出现。

6.胶片的宽度和光点位置

膜的宽度一般为18mm(或20mm)和25mm，分别用于试纸和测试板。

但是不同的T线采样位置会带来不同的灵敏度。当取样位置上移时，金标化合物通过T线位置的速度会变慢，反应时间增加，灵敏度提高。反之，灵敏度会降低。该方法可用于改变灵敏度和消除假阳性。

7.溶液在膜上的扩散

一般来说，膜上溶液的样品量为1ul/cm。

膜上溶液的扩散趋向两端，喷点是均匀的抗体溶液。但干燥时，线边缘的干燥速度高于中间，中间的抗体会继续向两边扩散，所以干燥后抗体会聚集在线的两端。一般不会影响你的实验。如果你发现线的两端是红色的，中间是亮的，你就要考虑这个问题了。可以加入上面提到的作用物质来解决。

8.贴膜前后的密封效果

从供应商处购买的胶片基本都是经过优化的，可以直接使用。但是，我们经常会遇到关于封闭的讨论。

其实封闭并不像大家想的那样。一旦关闭，一切都将迎刃而解。老问题走了，新问题又来了，更麻烦了。我想说的是慎用闭包。

我极度反对先封后点膜的方法。原因是厂家生产胶片的时候，各种配方都是和原浆混合在一起的。他们在点膜前封膜时，必须将膜浸泡在封液中，这必然会扰乱膜中物质的正常分布。这造成了许多问题，降低了工作效率。有的厂家遇到不封膜就不能覆膜的问题，其实可以用其他方法解决，封膜必然要测。

我常用的密封技术有两种。

流动被关闭，活性物质在样品垫上被处理。

膜在固定点密封，活性物质混合成溶液，喷洒在膜的特定位置。这种方法需要使用BIODOT的空气喷射喷嘴，它可以使不合格的半成品板复活。

只要在膜上做了密封，必然会影响产品的稳定性。具体影响程度要通过稳定性试验来判断。

9.膜的储存

新生产的薄膜一般含有5-10%的水分。电影的老化机制有理论支持，但有争议。根据理论，薄膜的老化是由于薄膜上的水分蒸发，使薄膜疏水、带电、易碎。存放胶片的一般要求是避光密封。太干或太湿都是不利的。在这种储存条件下，一般可以保存两年。然而，

由于生产工艺的问题，有些膜在使用后的一段时间内，其灵敏度会发生变化。如出现此类问题，需将膜订购后放置一段时间，待稳定后再投入调试生产。